Comparación de patrones electroforéticos de Peroxidasas de raíz de Brassica napus, Raphanus sativus y frutos de Sechium edule y Cucumis sativus

Resumen

RESUMEN

En el presente trabajo de investigación se estudió, los extractos pre-purificados de peroxidasa (POD) de: Brassica napus, “naboâ€, Raphanus sativus “rabanitoâ€, Sechium edule “caigua china†y Cucumis sativus “pepinilloâ€. Se encontró que la actividad de POD 128 U/g; 272 U/g; 27.20 U/g; y 12.40 U/g respectivamente. Se realizó la extracción de la Peroxidasas, las raíces de nabo y rabanito y frutos de caigua china y pepinillo, previamente seleccionados y analizados el mismo día de su recolección. El extracto crudo se obtuvo por extracción directa de 250 g de cada uno de los vegetales en mención en un licuestractor (Oster), se filtró 2 ó 3 veces al vacío con papel whatman de poro decreciente y finalmente se centrifugó por 10 minutos a 3500 rpm. Luego, el sobrenadante obtenido fue diluido con igual volumen de buffer fosfato 20 mM pH 6.0 y se conservó en congelación.  La medición de la actividad de peroxidasa se llevó a cabo en espectrofotómetro a temperatura ambiente (25oC) utilizando 50 uL de la solución de enzima en 4 mL de buffer fosfato 10 mM de pH 6,0 conteniendo guayacol en (2mM) y H2O2 (4,4 mM) como sustratos. Se midió los cambios de absorbancia debidos a la oxidación de guayacol por la POD por 2 minutos. En el enzimograma se corrió el extracto crudo de POD + SDS, se observa en nabo 4 bandas, en pepinillo 3 bandas, en rabanito 7 bandas y en caigua 1 banda; en el enzimograma cuando se corrió solamente el extracto crudo de POD, se observa también 4 bandas para nabo, 4 para pepinillo y 6 bandas para rabanito y 5 bandas para caigua. Se observa también la presencia bandas claras y bandas intensas, todas ellas en el rango de peso molecular bajo entre 80,660 y mayor igual a 103,035 Daltons y otras entre 28,829 y 36,545 Daltons (Prestained SDSPAGE standards, BIO_RAD).

Palabras claves:  extracto de peroxidasa, nabo, rabanito, caigua y pepinillo.

 

 

 

ABSTRACT

The pre-purified peroxidase (POD) extracts of: Brassica napus, "turnip", Raphanus sativus "rabanito", Sechium edule "caigua china" and Cucumis sativus "gherkin" were studied. It was found that POD activity 128 U / g; 272 U / g; 27.20 U / g; and 12.40 U / g respectively. The extraction of peroxidases, roots of turnip and radish and fruits of Chinese cañon and gherkin, previously selected and analyzed on the same day of collection, was carried out. The crude extract was obtained by direct extraction of 250 g of each of the aforementioned vegetables in a liquefier (Oster), filtered 2 or 3 times under vacuum with decreasing pore whatman paper and finally centrifuged for 10 minutes at 3500 rpm. Then, the obtained supernatant was diluted with an equal volume of 20 mM phosphate buffer pH 6.0 and kept in freezing. The measurement of peroxidase activity was carried out in a spectrophotometer at room temperature (25oC) using 50 uL of the enzyme solution in 4 mL of 10 mM phosphate buffer pH 6.0 containing guaiacol in (2mM) and H2O2 (4,4 mM) as substrates. The absorbance changes due to the oxidation of guaiacol by the POD for 2 minutes were measured. In the enzymogram, the crude POD + SDS extract was run, 4 bands are observed in turnip, 3 bands in gherkin, 7 bands in radish and 1 band in caigua; In the enzyme diagram when only the raw POD extract was run, 4 bands are also observed for turnip, 4 for pickle and 6 bands for radish and 5 bands for caigua. The presence of clear bands and intense bands is also observed, all of them in the low molecular weight range between 80,660 and greater equal to 103,035 Daltons and others between 28,829 and 36,545 Daltons (Prestained SDS-PAGE standards, BIO_RAD).

Key words: tres (03) o cuatro (04) palabras