Producción y aislamiento de b-galactosidasa de Kluyveromyces sp

Resumen

RESUMEN

El objetivo de esta investigación fue la producción y el aislamiento de b-galactosidasa de Kluyveromyces sp cultivada en suero de leche desproteinizado. Se indujo la producción de b-galactosidasa adaptando lactosa a la cepa de Kluyveromyces sp, como única fuente carbonada. El suero desproteinizado por termocoagulación fue analizado químicamente, obteniendo 94,5% de humedad, 0,3% de proteína, 4.8% de lactosa y pH 4,6. La producción de b-galactosidasa se realizó en un fermentador de 2 L, el cual contuvo 1350 mL de medio de producción y 150 mL de inóculo, ambos preparados con suero desproteinizado suplementado con 0,15% de extracto de levadura y 0,10% de (NH ) SO , ajustado a pH 5,0 y esterilizado en autoclave por 10 minutos a 120 °C. Ambos medios 4 2 4 fueron incubados a 30 °C por 19 horas, a 190 rpm y con aireación suave y constante. La extracción de lab-galactosidasa se hizo, primero, separando las células por centrifugación a 6000 rpm por 10 minutos, y, luego,adicionando tolueno a razón del 2% (V/V) y centrifugando a 6 000 rpm por 20 minutos, para obtener el sobrenadante que contuvo a la b-galactosidasa. La b-galactosidasa fue aislada precipitándola con acetona a 0 °C, a razón de 50% (V/V), y separándola por centrifugación a 6 000 rpm por 30 minutos. Se determinó la concentración de proteínas según el método de Lowry et al. y se ensayó la actividad de b-galactosidasa con O-nitrofenilb-D-galactopiranósido como sustrato. Se observó mayor producción de b-galactosidasa al cabo de varias generaciones de adaptación de la levadura a la lactosa, obteniéndose 6,5 U/mL de -galactosidasa cruda. Se logró aislarb-galactosidasa con un rendimiento del 37,23% y 6,8 veces de purificación. Se concluyó que es posible producir buena cantidad de b-galactosidasa cultivando Kluyveromyces sp en suero de leche desproteinizado.

Palabras clave: Producción y aislamiento, beta-galactosidasa, Kluyveromyces sp.

ABSTRACT

The goal of this research was the production and isolation of -galactosidase from Kluyveromyces sp grown indeproteinized whey. First, -galactosidase production was induced adapting lactose to the strain Kluyveromycessp as the only carbon source. The deproteinized whey obtained by thermocoagulation was chemically analyzed,obtained 94,5% moisture, 0,3% protein, 4,8% lactose, and pH 4,6. The -galactosidase production wasperformed in a 2 L fermentor, which contained 1350 mL of production medium and 150 mL of inoculum, bothprepared with deproteinized whey supplemented with 0,15% yeast extract and 0,10% (NH ) SO , adjusted to 4 2 4pH 5,0 and autoclaved for 10 minutes at 120 °C. Both media were incubated at 30 °C for 19 hours, at 190 rpm agitation and aeration smooth and steady. Removal of the -galactosidase was, first, separating the cells by centrifugation at 6000 rpm for 10 minutes, and, then, adding toluene at a rate of 2% (V/V) and centrifuged at 6 000 rpm for 20 minutes to obtain the supernatant which contained the -galactosidase. The -galactosidase was isolated precipitating with acetone at 0 °C at a rate of 50% (V/V), and separated by centrifugation at 6 000 rpm for 30 minutes. We determined protein concentration by the method of Lowry et al. and were tested for -galactosidase activity with O-nitrophenyl- -D-galactopyranoside as substrate. A higher -galactosidase production after several generations of yeast adaptation to lactose was observed, yielding 6,5 U/mL of crude -galactosidase. Was isolated -galactosidase with a yield of 37,23% and 6,8 times of purification. In conclusion itis possible to produce good amount of -galactosidase growing Kluyveromyces sp, in deproteinized whey.

Key words: Production and isolation, b-galactosidase, Kluyveromyces sp.